     河南中医学院邵素霞 (郑州，450003)
     河南中医药医学研究所邓木秀(郑州，450004)

    摘要：探讨百福生胶囊对荷瘤小鼠体内和体外的抗肿瘤机理，方法体内抑瘤实验：分别对肉瘤S180和H22腹水肝癌小鼠模型灌胃给药后取瘤称重，计算抑瘤率判断百福生胶囊对两种瘤体的抑制作用；生存期实验：荷瘤小鼠接种癌细胞后24hr开始灌胃给药，10天于每3天给药一次，比较各组小鼠存活时间；体外抑瘤实验：用体外培养法研究百福生胶囊对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。结果：百福生胶囊对两种实体瘤均有显著的抑制作用，并明显延长荷瘤小鼠的存活天数，同时，该产品可有效抑制HeLa细胞的生长。
    关键词  百福生胶囊  S180肉瘤细胞株  H22肝癌细胞株  HeLa细胞株  TGI 肿瘤细胞杀伤率

    近年来，国内进行了大量的中草药抗癌与临床实验研究，发现不少补益类中药对小鼠的某些移植性肿瘤具有一定的抗癌作用[1]。本研究旨在对由黄芪、枸杞子、西洋参、女贞子、黄精等补益类中药配伍的复方—百福生胶囊的抗肿瘤作用进行初步探讨，现将方法与结果报告如下：
    1、实验材料
    1.1  百福生胶囊：由郑州博生医药技术发展有限公司生产，内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒。批号：010903，人体推荐量：每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算（成人体重为60kg）即0.06g/天/kg。
    1.2  试剂
小牛血清：上海生物制品研究所提供，56℃、30min灭活，-20℃冰箱保存。
    PRMI1640培养液：PRMI培养干粉(GIBCO)、1%多抗(青、链霉素各 100μg/ml，卡那、庆大霉素各50μg/ml)，应用时附加10%的小牛血清。
生理盐水：郑州化学制药厂生产，批号：010503。
    1.3 仪器
    750－G型分光光度计，CO2培养箱等。
    1.4  动物
    昆明种小鼠，雌雄均用，体重20g±2g，由河南医科大学实验动物中心提供。合格证号：豫动合格证字176号。实验室室温为22-25℃，常规饲料喂养，饮水量不限。
    1.5 瘤株
    肉瘤S180：为河南省医科所药理研究室保存的传代瘤株，制备方法如下：选择无破损无感染生产良好的传代8-10天的瘤株，在无菌条件下，将瘤体称重后剪碎，匀浆，与NS之比为1:4，制成瘤悬液，接种于受试鼠腋部皮下，0.2ml／只。
    H22小鼠肝癌腹水型肿瘤细胞株：由中科院上海肿瘤药物研究所。
    1.6 细胞
    人宫颈癌HeLa细胞，细胞株由河南省医科所药理研究室提供。
    2  实验方法
    2.1 百福生胶囊体内抑瘤实验[2]
    无菌条件下取肉瘤S180和H22腹水肝癌荷瘤小鼠，处死固定，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤，然后切开，选择生长良好的瘤块组织置于组织浆器中，制成1×10^7/ml的细胞悬液，接种于小鼠右前肢皮下，0.1ml/只，次日将接种两种癌细胞的小鼠各随机分为5组，每组8只，分别为阴性对照组、百福生胶囊低、中、高剂量组及环磷酰胺（CPA）阳性对照组，按表1所示剂量灌胃给药，每日1次，连续10天，于末次给药后24hr处死小鼠，摘瘤称重，以抑瘤率（TGI）判断抑瘤效果，抑瘤率计算公式如下：TGI(%)=（对照组瘤重-实验组瘤重）/对照组瘤重×100%。试验重复3次，结果为3次试验的平均值。
    2.2 百福生胶囊对荷瘤小鼠的生命延长作用观察
    无菌条件下取肉瘤S180和H22腹水肝癌荷瘤小鼠，以2.1方法制成1×10^7/ml的细胞悬液，接种于小鼠腹腔，0.2ml/只，接种次日，两种癌细胞的荷瘤小鼠随机分为5组，组别、剂量同2.1。每日灌胃给药，连续10天后，改为每日3天给药一次，记录各组动物死亡时间，比较各实验组与对照组动物生存期差异。
    2.3 百福生胶囊体外荷瘤小鼠实验[2]
    将培养瓶中的Hela细胞经0.25%胰酶消化贴壁的细胞，然后用加10%小牛血清的RPMI1640培养液稀释成105数量级的肿瘤细胞悬液，在消毒后的培养板上每孔加0.1ml的肿瘤细胞稀释液，然后加入生理盐水、百福生胶囊低、中、高三个不同的剂量及环磷酰胺（CPA），每种浓度重复4孔，以仅加肿瘤细胞稀释液而不加药的孔作为对照，高压灭菌，用前PH调至7.2，将培养板置CO2培养箱中37℃培养24h后，在倒置显微镜下定性观察细胞生长情况。用生理盐水洗去培养液中的小牛血清及不贴壁的死细胞，每孔加1%SDS0.2ml，将培养液置50℃的烘箱中加热30min，使细胞溶解成可溶性蛋白质。最后将4孔的蛋白液混匀，用751G型分光光度计，在波长650nm处进行比色，并计算肿瘤细胞杀伤率。
实验组细胞蛋白质光密度值
肿瘤细胞杀伤率(%)＝1－ ─────────────×100%
对照组细胞蛋白质光密度值
    3 实验结果
    3.1 百福生胶囊对肉瘤S180和H22肝癌腹水瘤荷瘤鼠实体瘤生长抑制作用及存活期的影响见表1。
      表1  百福生胶囊对肉瘤S180和H22腹水肝癌的抑瘤作用及生存期的影响
瘤种分  组动物
(始/终) 剂量(/kg/d)    存活天数
（d）瘤重
(g) 抑瘤率
(%)

S180

阴性对照组 8/6 20ml 16.12±2.67 1.86±0.45             —
CPA对照组 8/8 25mg 22.08±1.85 0.59±0.52 68.28
百福生低剂量组 8/8 0.2 g 17.44±1.05 ## 1.18±0.71 *# 36.56
百福生中剂量组 8/8 0.6 g 19.63±3.54 *# 0.91±0.44 *# 51.08
百福生高剂量组 8/8 1.8 g 18.64±2.11 *# 0.82±0.76 **# 55.91

H22 阴性对照组 8/7 20ml 15.82±3.04 1.53±0.91             —
CPA对照组 8/8 25mg 22.47±1.42 0.45±0.22 70.59
百福生低剂量组 8/8 0.2 g 17.81±2.33*## 0.93±0.71 *# 39.22
百福生中剂量组 8/8 0.6 g 20.32±2.14 **# 0.68±0.59 ** 55.56
百福生高剂量组 8/8 1.8 g 19.17±1.66 **# 0.65±0.48 ** 57.52
注：与阴性对照组比较，*P<0.05；** P<0.01. 与CPA对照组比较，#P<0.05；## P<0.01.
    表1结果显示，百福生胶囊低、中、高剂量组对S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤均具有较明显的抑制作用，尤其以百福生胶囊高剂量组效果尤为显著，其对S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤抑瘤率分别为：55.91%、57.52%。与阴性对照组比较，低、中剂量组P<0.05、高剂量组P<0.01;与CPA对照组相比，差异有显著意义(P<0.05)。实验结果还表明，百福生胶囊低、中、高剂量组均能明显延长S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤的存活期，提示百福生胶囊对S180肉瘤及H22肝癌腹水瘤有明显的抑制作用，同时可延长荷瘤动物的生存期限。
    3.2  百福生胶囊体外抑瘤实验结果详见表2。
　　　表2  “百福生胶囊”体外抑瘤实验结果统计
浓度(g/ml) 　　　　　  Hela细胞杀伤率(%)　　
百福生胶囊组        CPA组
4×10^-1   　      65.54             80.62   　　  　　　
1×10^-1       　  59.38             72.44 　　       　　　
2.5×10^-2         43.15      　　   65.21　               　　　
6.25×10^-3        32.51　　　       41.63                　　　

    体外抑瘤实验结果表明，“百福生胶囊”对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞具有较好的抗癌活性，且呈一定的量效关系。　　　　　　　　
    4 讨论
    中医认为肿瘤的发生与脏腑失调、正气虚弱、体内抗病能力减弱及免疫监视功能下降有关，因此在肿瘤的治疗上强调补正气、调真元、增强免疫,正所谓“正气存内，邪不可干”。通过扶正固本，免疫调节，增强机体抗病能力，从而影响肿瘤的发生、发展和转归。本实验结果证明百福生胶囊对多种瘤株都具有明显的抑制作用，并且能延长荷瘤小鼠的生存期。

参考文献
1. 程晓东，郭峰等.中药扶正方对小鼠Lews肺癌的疗效及其学机理的研究［J］，中国中西医结合杂志，1997,17(2):88.
2. 韩锐，主编.抗癌药物研究与实验技术［M］.北京：北京科医大学，协和医科大学联合出版社，1997：284.