河南省药品检验所    王亚平(郑州，450003) 
    河南中医药医学研究所  邓木秀(郑州，450004)

    摘  要  目的：观察百福生胶囊对小鼠的迟发型变态反应、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及抗体生成细胞检测的影响。方法：采用足跖增厚法观察小鼠的迟发型变态反应，以Jerne改良载片法检测抗体生成细胞及采用体外法对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞进行试验。结果：百福生胶囊对小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均有显著作用，百福生胶囊高、中、低三个剂量组与溶剂对照组比较，中、高剂量组均有显著性差异（P<0.05、0.01）。结论：百福生胶囊具有免疫调节作用。
    主题词  百福生胶囊  免疫功能　吞噬率 吞噬指数  溶血空斑 　  
    百福生胶囊由黄芪、枸杞、西洋参、女贞子、黄精等补益类中药组成，具有益气补虚、调节免疫、抗疲劳的功效。本研究旨在进一步探讨百福生胶囊对小鼠的细胞免疫、体液免疫、单核—巨噬细胞功能的作用。
    1、材料与方法
    1.1  药品：百福生胶囊由郑州博生医药技术发展有限公司生产，内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒。批号：010903，临床推荐量为：每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算（成人体重为60kg）即0.06g/天/kg。
    1.2  动物：清洁级BALB/C雄性小鼠，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号：沪动合格证字153号。将小鼠分为三批，每批48只，体重18～20g，随机分为四组，每组12只。
    1.3  剂量选择：百福生胶囊三个剂量组低、中、高分别为人体推荐量的3.3、10、30倍，即0.2、0.6、1.8g/kg.bw，溶剂对照组为蒸馏水。经口灌胃，灌胃量为0.2ml/10g.bw，各试验组均连续灌胃30天后测各组相应的免疫指标。
    1.4  实验方法和观察指标
    1.4.1  迟发型变态反应  
    绵羊红细胞诱发小鼠DTH（足跖增厚法）：取羊血，用生理盐水洗涤3次（2000rpm，10分钟），每只小鼠经腹腔注射2%（v/v，用生理盐水配制）压积SRBC0.2ml，致敏后4天，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20%（v/v，用生理盐水配制）压积SRBC 20μl，于注射后24小时测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。
    1.4.2  抗体生成细胞检测（Jerne改良载片法）
    将压积SRBC用生理盐水配成2%的细胞悬液，每只小鼠腹腔注射0.2ml进行免疫，四天后，将小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5ml RPMI1640培养液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×106个/ml。将表层培养基（1g琼脂糖加双蒸水至100ml）加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2～7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μ1 10%SRBC（v/v，用SA液配制），25μ1脾细胞悬液（5×106个/ml），迅速混匀，倾到于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体（1:6）加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。
    1.4.3  小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（体外法）
    实验前4天给每只小鼠腹腔注射2%压积绵羊红细胞0.2ml。用颈椎脱臼法处死小鼠，经腹腔注射给予小鼠含有5%小牛血清的Hank’s液5ml/只，约2分钟后抽取腹水1～2ml，将Hank’s液配制成1%鸡RBC悬液0.5ml和0.5ml的腹水加入试管内，混匀，取混悬液0.5ml涂片，放入垫有湿纱布的瓷盘内，置37℃温箱内25min，取出后用生理盐水从玻片背面冲洗，固定、染色、阅片。计算吞噬率和吞噬指数。
    2  结果
    2.1  百福生胶囊对绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH的影响
    表1  百福生胶囊对绵羊红细胞诱导小鼠DTH的作用
组   别 动物数（只） 24h足跖肿胀度（mm） P值
溶剂对照组 12 0.16±0.13 —
百福生低剂量组 12 0.30±0.09 0.168
百福生中剂量组 12 0.37±0.20 0.005
百福生高剂量组 12 0.34±0.13 0.030
由表1可见，百福生胶囊中、高剂量组的足跖肿胀度高于溶剂对照组，差异均有显著性意义(中剂量组P<0.01、高剂量组P<0.05)，提示本试验条件下百福生胶囊能增强小鼠的迟发型变态反应。
    2.2  百福生胶囊对抗体生成细胞的影响
    表2  百福生胶囊对抗体生成细胞数的影响
组   别 动物数（只） 溶血空斑数（个/全脾） P值
溶剂对照组 11 130.2±45.8 —
百福生低剂量组 11 172.3±47.6 0.464
百福生中剂量组 11 195.7±55.1 0.050
百福生高剂量组 11 210.4±79.0 0.015

    由表2可见，百福生胶囊高剂量组溶血空斑数/全脾高于溶剂对照组，差异具有显著性意义(P<0.05)，提示本试验条件下百福生胶囊中、高剂量组对小鼠抗体生成细胞的生成有促进作用。
    2.3  百福生胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响
    表3  百福生胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响
组    别 动物数(只) 吞噬数(%) P值 吞噬指数 P值
溶剂对照组 12 37.3±7.2 — 0.65±0.14 —
百福生低剂量组 12 39.7±7.7 0.945 0.79±0.13 0.298
百福生中剂量组 12 40.6±5.9 0.811 0.81±0.20 0.0452
百福生高剂量组 12 46.0±5.8 0.017 1.00±0.22 0.001

    由表3可见，百福生胶囊高剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力（吞噬率和吞噬指数）高于溶剂对照组，差异具有显著性意义（吞噬率P<0.05，吞噬指数P<0.01），提示本试验条件下百福生胶囊中、高剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有明显的升高作用。
    3 讨论
    百福生胶囊系由黄芪、枸杞、西洋参、女贞子等补益类中药组成。近年来的实验研究证明：补益类中药如黄芪、西洋参、人参、枸杞、女贞子、黄精等具有较好的免疫增强作用和免疫调节作用，能使参与细胞免疫的数量增多，活性增强，使参与体液免疫的抗体增多[1]。黄芪能增加小鼠网状内皮系统的吞噬功能，使其吞噬指数明显提高，能显著增强肿瘤浸润淋巴细胞的体外杀伤活性，黄芪与人参皂甙合用对淋巴细胞具有协同正向调节作用[2]。人参皂甙对环磷酰胺所致的免疫功能抑制有对抗作用，使巨噬细胞的吞噬功能、白细胞数、迟发型超敏反应有明显改善[3]。枸杞多糖能提高小鼠吞噬细胞的吞噬功能和血清溶菌酶活性，增加小鼠脾淋巴细胞数和LAK细胞活性，提高实验动物和正常人淋巴细胞转化率。老年人服用枸杞多糖或枸杞子均可增强其细胞免疫和体液免疫[4]。小鼠腹腔注射女贞子多糖（FLLPS）可明显对抗CY所造成的荷瘤小鼠的淋巴增殖反应的抑制低下作用，能使恶性肿瘤病人淋巴细胞引起的局部抗宿主反应增强，无论是体内体外，女贞子均有增强免疫功能的作用[5]。
    实验结果表明：百福生胶囊对小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均有显著作用，高、中、低三个剂量组与溶剂对照组比较，差异有显著性意义（P<0.05）。从以上实验指标表明：百福生胶囊对小鼠的细胞免疫、体液免疫、单核—巨噬细胞功能有明显促进作用，同时，通过实验研究也可进一步从另一角度证明百福生胶囊在恶性肿瘤、肝炎、支气管哮喘等疾病治疗过程的疗效机理与其免疫调节有关。

参考文献
1. 李蜀眉，塔娜.几味中药免疫作用的研究近况。内蒙古中医药，1999：3：40-41
2. 李东复等，黄芪、人参皂甙对肺癌浸润淋巴细胞体外抗肿瘤作用的影响.中国免疫学杂志，1997;13(5):296~297
3. 李忠，免疫中药学，第1版，郑州：河南医科大学出版社，1996；192
4. 李忠，免疫中药学，第1版，郑州：河南医科大学出版社，1996；194
5. 陈可冀等，新编抗衰老中药学［M］.北京：人民卫生出版社，1998；509

第一作者简介：王亚平，(1953年)，女，河南郑州人，馆员，主要从事文献，实验工作。