      北京中医药大学基础医学院    徐江雁  陈明  (北京 100029)

    摘  要目的：探讨百福生胶囊对自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴细胞因子活化杀伤细胞(LAK细胞)活性的影响。方法：采用乳酸脱氢酶法(LDH)对NK细胞活性和LAK细胞活性进行检测。结果：百福生胶囊可显著提高小鼠NK细胞及LAK细胞活性，百福生胶囊中、高剂量组与溶剂对照组比较，差异有显著性意义（P<0.05、0.01）。结论：百福生胶囊具有免疫调节作用。
    主题词  百福生胶囊  免疫功能　NK细胞  LAK细胞

    百福生胶囊由黄芪、西洋参、枸杞子、女贞子、黄精等补益类中药组成，近年来临床上用于治疗恶性肿瘤和机体免疫力低下的疾病。有关动物试验显示其具有免疫调节和抗肿瘤作用。为此我们通过对小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴细胞因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)活性影响的实验研究，进一步探讨百福生胶囊对恶性肿瘤的治疗机理。
    1、材料与方法
    1.1  药品：百福生胶囊（郑州博生医药技术发展有限公司生产，批号：010903）内容物为褐色粉状，胶囊装，0.3g/粒，100粒/瓶。人体推荐量为：每日3次，每次3-4粒，以每人每天3.6g计算（成人体重按60kg）即0.06g/天/kg。
    1.2  动物：清洁级BALB/C雄性小鼠，由北京市实验动物中心提供，合格证号：沪动合格证字153号。将小鼠分为三批，每批48只，体重18～20g，随机分为四组，每组12只。
    1.3  剂量选择：百福生胶囊分三个剂量组，低、中、高剂量分别为人体推荐量的3.3、10、30倍，即0.2、0.6、1.8g/kg.bw，溶剂对照组为N.S。经口灌胃，灌胃量为0.2ml/10g.bw，各试验组均连续灌胃30天后测各组相应的免疫指标。
    1.4  实验方法和观察指标
    1.4.1  NK细胞活性测定
    无菌条件下取小鼠的脾脏，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用4层纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min（1000r/min），最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10^7ml，取靶细胞和效应细胞各100μ1（效靶比50:1），加入U型96孔培养板；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μ1，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μ1；上述各项均设三个复孔，于37℃、5%CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μ1置平底96孔培养板，同时加入LDH基质液100μ1，反应3min，每孔加入1mol/L的HCL 30μ1，在酶标仪490nm处测定光密度值（OD）：
NK细胞活性%=                         ×100%
    1.4.2  LAK细胞活性测定
    分别处死小鼠，无菌条件下取小鼠的脾脏，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用4层纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min（1000r/min），加入pH7.2的Tris-NH4Cl溶解红细胞后，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×107 •ml-1，加入rIL-2200U •ml-1，培养72min，诱导LAK细胞生成。将LAK细胞(效应细胞)和传代后24h生长旺盛的YAC-1细胞(靶细胞)用RPMI1640液洗2次后，用含0.5%BSA的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度分别为5×106 •ml-1个和1×105 •ml-1个，取靶细胞和效应细胞各100μ1（效靶比50:1），混合2种细胞，靶细胞杀伤率用乳酸脱氢酶法(LDH)进行检测［1］。
    2  结果
    2.1  百福生胶囊对小鼠NK细胞活性的影响
    表1  百福生胶囊对小鼠NK细胞活性的影响
组    别动物数(只) NK细胞活性% P值
溶剂对照组 12 38.4±14.1 —
百福生低剂量组 12 47.3±14.8 0.534
百福生中剂量组 12 57.1±15.3 0.050
百福生高剂量组 12 70.1±10.4 0.008
    由表1可见，百福生胶囊中、高剂量组的NK细胞活性高于溶剂对照组，差异具有显著性意义（P<0.05、0.01），提示本试验条件下百福生胶囊对NK细胞活性有明显的增强作用。
    2.2 百福生胶囊对小鼠LAK细胞活性的影响
    表2  百福生胶囊对小鼠LAK细胞活性的影响
组    别动物数(只) LAK细胞活性% P值
溶剂对照组 12 17.4±5.17 —
百福生低剂量组 12 22.8±5.64 0.534
百福生中剂量组 12 30.3±6.11 0.050
百福生高剂量组 12 32.7±6.08 0.007

    由表2可见，百福生胶囊中、高剂量组的LAK细胞活性高于溶剂对照组，差异具有显著性意义（P<0.05、0.01），提示本试验条件下百福生胶囊对LAK细胞活性有明显的增强作用。
    3 讨论
    NK细胞为自然杀伤细胞，是机体抗肿瘤的第一道防线，它可以非特异性的直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞而无须抗体存在和抗原致敏［2］。LAK细胞为淋巴细胞因子激活的杀伤细胞，可杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无损伤。近年来的研究表明，NK细胞和LAK细胞可以溶解各种类型的肿瘤细胞，在抗肿瘤细胞免疫作用中具有重要地位［3］。
    百福生胶囊由黄芪、西洋参、枸杞子、女贞子、黄精等补益类中药组成。有研究报道：黄芪煎剂以25g/kg的剂量给小鼠灌饲１周，可使NK细胞活性提高约２倍，体外用药能显著增强NK活性。黄芪多糖与IL-2配伍，所产生的LAK活性较单用IL-2成倍增加［4］。人参皂甙于体内外可增高NK、IL-2和干扰素活性[5]。人参多糖能明显提高小鼠脾脏NK细胞活性，使荷瘤小鼠的NK细胞活性恢复正常，IL-2和干扰素分泌量明显增加[6]。枸杞多糖能使正常小鼠外周白细胞数增加，提高免疫抑制小鼠NK细胞的杀伤活性[7]。同时，枸杞多糖可增加脾淋巴细胞数和体外增强LAK活性[8]。
    本实验研究显示：百福生胶囊中、高剂量均能显著提高小鼠的NK细胞和LAK细胞活性，P<0.05，从而佐证了百福生胶囊临床上用于治疗恶性肿瘤的作用机理与提高患者机体的NK细胞和LAK细胞活性不无关系，说明百福生胶囊不仅能益气补虚，而且可以通过提高患者的抗肿瘤免疫力而扶正祛邪。

参考文献
1. 王甫厚,陈绍先等，LDH释放法测NK细胞毒的方法学研究［J］，中国免疫学杂志，1990，(6)2:115
2. 张彩，田志刚综述、粘附，NK细胞的免疫学特性及其抗癌效应，国外医学肿瘤分册，1997;24(3):144-166
3. 常金丽,成人杰，人LAK细胞体外肿瘤作用机理探讨［J］，中国免疫学杂志，1991,7(2):106
4. 张晓明，杨景山，白细胞介素2与黄芪多糖对小鼠NK细胞活性和增殖及形态的影响，北京医科大学学报，1991,23(3):176-178
5. 李凌夫，人参皂甙对正常成人外周血NK和LAK细胞活性影响的实验研究，中医药信息，1996,13:52
6. 李忠，免疫中药学，第1版，郑州：河南医科大学出版社，1996;192
7. 刘彦平，李积东，枸杞多糖对小鼠NK细胞和白细胞活性的免疫调节作用，青海医学院学报，2001,22(1):1-2
8. 李忠，免疫中药学，第1版，郑州：河南医科大学出版社，1996;194